荧光显微镜孔径光阑和视场光阑的校准

一般荧光显微镜均采用柯勒照明。所谓柯勒照明是一种能够得到图像Z大对比和Z大分辨的折中方法。这时，灯丝成像在孔径光阑上，一般也成像在物镜Z后一片镜框上。孔径光阑是限制光源大小的光阑，而视场光阑是限制人眼在目镜里看到视野大小的光阑。只有在正确校准柯勒照明的条件下，荧光显微镜才能获得它的更合适的光学性能。

柯勒照明校准方法如下：

①调焦：把样品放在工作台上，沿光轴方向移动工作台或物镜，对样品进行调焦，使成像清晰。

②打开孔径光阑，把孔径光阑开到Z大。

③关小视场光阑，于是在视场里可以看到视场光阑的影子，即周围一圈变暗，只有中间是亮的。调节聚光镜上下位置，使视场光阑边缘清晰。调节聚光镜上调中螺丝，使视场光阑居

④减小孔径光阑，一直到视场里看到Z好的像为止，一般孔径光阑为其Z大时的70%。